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粗蛋白测定原理

时间:2022-06-09   访问量:1191

蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系,其中含碳50~55%、氢6~8%、氧20~23%、 氮15~ 17%和硫0.3~2.5%。 此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征,而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近,一般恒定在15~17%,平均值为16%左右,因此在蛋白质的定量分析中,每测得1克氮就相当于6.25克蛋白质。所以只要测定出生物样品中的含氮量,再乘以6.25,就可以计算出样品中的蛋白质含量。含氮有机物与浓硫酸共热,被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,氮进一步 与硫酸作用生成硫酸铵。

由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。为了加速消化,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290"C→400°C),加入硫酸铜作为催化剂, .过氧化氢作为氧化剂,以促进反应的进行。反应烧瓶内完成,反应在蒸馏装置中进行,其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。由于蒸汽发生器体积小,节省能源,本仪器使用方便,效果良好。硫酸铵与浓碱作用可游离出氨,借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后使溶液中的H浓度降低,然后用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来H浓度为止,最后根据所用标准酸的量计算出待测物中总氮量。


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